分子生物实验室常见有毒试剂

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点击次数:261 更新时间:2023年11月15日14:52:50 打印此页 关闭

分子生物实验常见有毒试剂


细胞实验

二甲基亚砜(Dimethyl sulfoxide,DMSO

用途:DMSO是一种渗透性保护剂,能够降低细胞冰点,减少冰晶的形成,减轻自由基对细胞损害,改变生物膜对电解质、药物、毒物和代谢产物的通透性。


但是研究表明,DMSO存在严重的毒性作用,与蛋白质疏水集团发生作用,导致蛋白质变性,具有血管毒性和肝肾毒性

DMSO是毒性比较强的东西,用的时候要避免其挥发,要准备1%-5%的氨水备用,皮肤沾上之后要用大量的水洗以及稀氨水洗涤。最为常见的为恶心、呕吐、皮疹及在皮肤、和呼出的气体中发出大蒜、洋葱、牡蛎味。

吸入:高挥发浓度可能导致头痛,晕眩和镇静。
皮肤:能够灼伤皮肤并使皮肤有刺痛感,如同所见的皮疹及水泡一样。若二甲基亚砜与含水的皮肤接触会产生热反应。要避免接触含有毒性原料或物质的二甲基亚砜溶液,因其毒性不为人所知,而二甲基亚砜却可能会渗入肌肤,在一定条件下会将有毒物质入肌肤。
吸收:吸收危险性很低。


蛋白电泳(Western Blot)

苯甲基磺酰氟(Phenylmethanesulfonyl fluoride,PMSF)

用途:常用于蛋白质的提取过程中,主要是丝氨酸蛋白酶抑制剂,苯甲基磺酰氟(PMSF)通常用于制备细胞裂解液,有助于保存样品。作为一种非特异性抑制剂,PMSF通常用于保护样品免受蛋白酶(如胰蛋白酶、糜蛋白酶和凝血酶)以及其他酶的消化功能的影响。PMSF也用于制备从细胞和组织中提取的蛋白质提取物。通过使含有这种氨基酸的任何酶的丝氨酸羟基失活,PMSF可以防止感兴趣的蛋白质降解。基于其短半衰期,必须在每个净化步骤中添加该抑制剂。


  • PMSF有危险吗? 

苯基甲基磺酰基氟化物是一种细胞毒性化学物质,只能在通风柜或经认证的生物实验台中使用。 

  • 有没有无毒的替代品? 

AEBSF(4-[2-氨基乙基]-苯磺酰氟化物、盐酸盐或Pefabloc)是一种无毒替代品。它是一种不可逆的丝氨酸蛋白酶抑制剂,使用浓度与PMSF相同,但在水缓冲溶液中无毒且稳定。


苯甲基磺酰氟(PMSF),它对呼吸道黏膜、眼睛和皮肤有非常大的破坏性。可因吸入、咽下或皮肤吸收而致命。戴合适的手套和安全眼镜,始终在化学通风橱里使用。在接触到的情况下,要立即用大量的水冲洗眼睛或皮肤,已污染的工作服丢弃掉。

四甲基乙二胺(Tetramethylethylenediamine,TEMED)
用途:TEMED常用于SDS-PAGE中凝胶的制备。与过硫酸铵连用催化丙烯酰胺的聚合,制取在凝胶电泳用于分离蛋白质或核酸的聚丙烯酰胺凝胶。

TEMED有强神经毒性,须防止误吸,TEMED易挥发,使用后请盖紧瓶盖,操作时快速,存放时密封。



十二烷基硫酸钠(Sodium Dodecyl Sulfate,SDS)

十二烷基硫酸钠 (SDS) 是一种经常用于蛋白电泳和蛋白增溶方法的烷基硫酸盐阴离子去污剂。它是很多细胞裂解缓冲液配方的成分,包括RIPA缓冲液。典型 SDS 或十二烷基硫酸盐制备物是多种不同链长度(C10 至 C18)的混合物。但是,蛋白复性和其他特殊方法要求非常特定的表面活性剂和缓冲液条件。SDS 的这一特殊配方经高度纯化,从而消除除 C12 外几乎所有二级链长度。


它是中等毒性物质,能对皮肤、眼睛、粘膜、上呼吸道、胃产生刺激等急性毒性反应。长期、反复使用其稀溶液能造成皮肤干裂和接触性皮炎。长期吸入对肺有损害,可能发生肺部过敏和导致严重的呼吸道功能紊乱。动物静脉注射试验结果表明,其对肺、肾和肝有明显的毒性反应。细菌的诱变试验为阴性。在化妆品和制剂处方中,主要的不良反应是在局部应用时对皮肤、眼睛产生刺激。

丙烯酰胺(acrylamide)—— 分离胶和浓缩胶中的成分

SDS-PAGE (十二烷基硫酸钠–聚丙烯酰胺,sodium dodecyl sulfate – polyacrylamidegel electrophoresis)


聚丙烯酰胺(polyacrylamidegel)本身是无毒的,因为当它进入人体时,大部分会在很短的时间内排出体外,不会被消化道吸收。大多数含有聚丙烯酰胺的产品不会刺激皮肤,只有一些水崩解物可能有残留碱,重复长期接触会刺激皮肤,但不会造成伤害。然而,丙烯酰胺是合成聚丙烯酰胺的单体,就丙烯酰胺而言,它是有毒的。丙烯酰胺是一种神经聚丙烯酰胺毒性剂,它会损害神经系统、浅表运动障碍、肌肉无力等中毒后的症状。

丙烯酰胺是2A类(很可能致癌)致癌物,其在动物和人体均可代谢转化为其致癌活性代谢产物——环氧丙酰胺。人们经常食用高温油炸食品会增加其致癌性,危害身体健康。丙烯酰胺具有中等毒性,对眼睛和皮肤有一定的刺激作用,可经皮肤、呼吸道和消化道吸收,在体内有蓄积作用,主要影响神经系统,急性中毒十分罕见。长期低浓度接触可引起慢性中毒,中毒者出现头痛头晕疲劳,嗜睡,手指剌痛,麻木感,常伴有两手掌发红,脱屑,手掌足心多汗,进一步发展可出现四肢无力,肌肉疼痛以及小脑功能障碍

具备以下任何一项者,可列为慢性丙烯酰胺中毒观察对象。
a.接触丙烯酰胺的局部皮肤出现多汗、湿冷、脱皮、红斑;
b.出现肢端麻木、刺痛、下肢乏力、嗜睡等症状;
c.神经-肌电图显示有可疑神经源性损害。

二硫苏糖醇(Dithiothreitol,DTT)

用途:用于稳定含有游离巯基的酶和其他蛋白质。已证明其可恢复这些基团因体外氧化而丧失的活性。DTT 可定量还原二硫键,确保单硫醇处于还原状态。在最终 0.1 M 浓度下,DTT 也广泛用于破坏 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳中的蛋白质二硫键。


有很强的还原剂,散发难闻的气味。可因吸入、咽下或皮肤吸收而危害健康。当使用固体或高浓度储存液时,戴手套和护目镜,在通风橱中操作。


DNA电泳(Southern blot)

溴化乙锭EB(Ethidium bromide,EB

用途:溴化乙锭是一种高度灵敏的荧光染色剂,用于观察琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶中的DNA。溴化乙锭用标准302nm 紫外光透射仪激发并放射出橙红色信号,可用Polaroid 底片或带CCD 成像头的凝胶成像处理系统拍摄。


溴化乙锭可以嵌入碱基分子中,导致错配。溴化乙锭是强诱变剂,具有高致癌性!溴化乙锭具有一定的毒性,皮肤吸收可造成伤害。刺激眼睛、皮肤、黏膜和上呼吸道。可诱导突变并可能致癌。戴好手套和护目镜,穿好防护服,在通风橱内小心操作。

RNA提取
TRIzol

用途:常温下为紫红色液体。其主要成分为苯酚和硫氰化胍。苯酚具有毒性和腐蚀性,而硫氰化胍则具有刺激性。PCR, Northern Blot 等实验中,Trizol 是一种常用的总 RNA 抽提试剂,可以直接从细胞或组织中提取总 RNA。在样品裂解过程中 Trizol 能够抑制 RNA 酶活性保持 RNA 完整性。其含有苯酚、异硫氰酸胍等物质,能迅速破碎细胞并抑制细胞释放出的核酸酶。TRIzol在破碎和溶解细胞时能保持RNA的完整性,因此对纯化DNA及标准化RNA的生产十分有用。


含有大量苯环类有毒物质,有很强的毒性、腐蚀性和挥发性,皮肤接触 Trizol 会引起烧伤,进入眼睛可能导致失明。不深接触请立即用大量去垢剂和水冲洗,如仍有不适,请听取医生意见。使用时戴手套、口罩和护目镜做好防护。

苯酚
苯酚可燃,高毒,对皮肤、粘膜有强烈的腐蚀作用,可致人体灼伤,可抑制中枢神经或损害肝、肾功能;对环境有严重危害,对水体和大气可造成污染。戴好合适的手套和护目镜,穿好防护服,在通风橱内操作。若有皮肤接苯酚,可用大量清水冲洗,并用肥皂和水清洗,不要用乙醇洗。

焦碳酸二乙酯(diethylpyrocarbonate)

DEPC即二乙基焦碳酸酯,可灭活各种蛋白质,是RNA酶的强抑制剂,是一种潜在的致癌物质。


DEPC是一种潜在的致癌物质,在操作中应尽量在通风的条件下进行,并避免接触皮肤。DEPC毒性并不是很强,但吸入的毒性是最强的,使用时戴口罩。不小心到手上注意立即冲洗。

氯仿(CHCl3)

用途:氯仿是分子量比较大的有机溶剂,在提取RNA时,氯仿可以有效使有机相和无机相迅速分离。RNA提取过程,有机相中主要是酚和蛋白结合,从而使得蛋白和RNA脱离,RNA进入水相。氯仿的作用有多个方面,加入氯仿,虽然有变性蛋白质的作用,但是其主要用处是用来分相,实际上是加速有机相和水相的分层;动物实验中,氯仿常用于用于各种动物的吸入麻醉,其麻醉作用比乙醚大,诱导期及兴奋期都极短,吸入气体中含 1~2% 容量的氯仿即能使动物麻醉。


对皮肤、眼睛、黏膜和呼吸道有刺激作用。它是一种致癌剂,可损害肝和肾。它也易挥发,避免吸入挥发的气体。操作时戴合适的手套和安全眼镜并始终在化学通风橱里进行。
免疫组化(IHC)
甲醛(HCOH)

用途:免疫组化实验中,取材后的组织或细胞需立刻投于固定剂中,使组织和细胞的蛋白质凝固,终止内源性或外源性酶反应,防止组织自溶或异溶,以保持原有结构和形态。


甲醛(福尔马林)有很大的毒性并易挥发,也是一种致癌剂(不做科研的人都知道)。很容易通过皮肤吸收,对眼睛、黏膜和上呼吸道有刺激和损伤。避免吸入其挥发的汽雾。要戴合适的手套和护目镜,始终在化学通风橱内进行操作,远离热源、火花及明火。

二甲苯

用途:用于免疫组织化学实验中组织的透明和石蜡切片的脱蜡。


二甲苯对眼及上呼吸道有刺激作用,高浓度时,对中枢系统有麻醉作用。急性中毒:短期内吸入较高浓度本品可出现麻醉作用。慢性影响:长期接触有神经衰弱综合症,女性有可能导致月经异常。皮肤接触常发生皮肤干燥、皲裂、皮炎。戴好手套和护目镜,在通风橱内操作。始终远离热源、火花和明火。

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1.不要在实验室吃东西。
2.不要随便闻试剂药品。
3.处理带腐蚀性的试剂时手套戴两层,还有口罩护目镜。
4.一定要穿好实验服(即使自己的实验没有危险,也不能保证别人做实验时不会溅到你身上)。
5.配置有毒试剂或挥发性试剂时一定要在通风橱中操作,这既是对自己负责,也是对同一区域的其他人负责。
6.做实验过程中不要戴着手套乱碰私人物品或开关门,同理,脱下手套后也别碰实验物品或徒手摸试验台。
7.紫外光或紫外线会损伤眼视网膜,切勿用裸眼和没有防护装置的紫外光源。
8.实验等待反应的时间尽量不要离开,生物实验大多很耗时间,如果一定要离开,千万要嘱咐别人帮忙照看。
9.勤用杀菌洗手液。
10.不要做任何你觉得可能不安全的事儿,保护自己的道理大家都懂,但可能会犯懒,千万不要心存侥幸,坚持养成好习惯受益终身。

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