污染，是 PCR 实验室出现实验假阳性、结果不可信、研发不可靠的重要推手，PCR 实验室应当将防污染作为日常管理、实验安排、清洁消毒、实验习惯的核心。PCR 实验污染和细胞污染是有差别的，PCR 实验污染主要是核酸而不是细菌和其他入侵者。因此所有的预防措施都会稍稍有所不同。「易查不易察」，污染来的悄无声息，我们该如何应对。今天给大家简单介绍一下 PCR 实验室的主要污染来源、实验中如何避免和减少污染的可能性及实验发生污染的应急处理方案。
PCR 实验室的污染来源
PCR 实验室的防污染方法
按照实验室的安全工作制度或安全标准操作程序，所有操作符合《实验室生物安全通用要求》（GB19489-2008）。
1、严格执行各区功能划分
试剂储存和准备区：贮存试剂的制备、试剂的分装和扩增反应混合液的准备，以及离心管、吸头等消耗品的贮存和准备。
标本制备区：核酸（RNA、DNA）提取、贮存及其加入至扩增反应管。对于涉及临床样本的操作，应符合生物安全二级实验室防护设备、个人防护和操作规范的要求。
扩增区：cDNA 合成、DNA 扩增及检测。
扩增产物分析区：扩增片段的进一步分析测定，如杂交、酶切电泳、变性高效液相分析、测序等。
试剂准备区、样本制备区和扩增区内的实验用品，包括移液器等器具应专用，空气、物品流向依次为：试剂准备区、样本制备区、扩增区、产物分析区，不可逆行。
2、清洁的实验用品
实验室自配试剂（去离子水、缓冲液等）和所有使用器具在使用之前均应高压灭菌或紫外杀菌。枪尖、反应管等实验耗材应一次性使用。
3、正确的实验操作
实验应在超净工作台内进行，工作台内应放置 PCR 专用的微量离心机、各量程的移液器和其他必须物品。
实验的过程中选择最合适尺寸的手套并能及时更换，在进出不同实验区域或进行模板操作后都应更换实验服、口罩、帽子及手套，以避免不同实验区交叉污染。
装有 PCR 试剂的反应管在打开之前应先瞬时离心，将管壁及管盖上的液体离至管底，降低污染手套或加样器的风险；谨慎开启反应管，防止管内液体溅出或形成气溶胶导致污染。
吸加试剂和模板的操作应严格按照规范要求进行，遵守「慢吸快打」原则，尽量一次性完成，忌多次抽吸，以避免气溶胶产生的交叉污染。
PCR 试剂建议小量分装，以减少反复冻融、重复取样次数；多样本 PCR 反应时，先配制反应混合液分装至反应管中，最后加入样本核酸，请勿同时开盖，尽量保证单人单管，实现完全闭管操作。
实验试剂应与样品和 PCR 产物分开保存，不应放于同处。
PCR 扩增实验完成后及时将反应管取出，用一次性手套将产物反应管包裹丢弃，保证管盖紧闭。
4、规范的实验设计
应遵循实验室内部质量控制的相关规定，实验中设立阳性对照、阴性对照和空白对照，全程质控实验过程，验证 PCR 反应的可靠性，并协助判断扩增系统的可信性。
PCR 实验室的污染应急处理方法
1、若核酸样本溢出
立即用布或纸巾覆盖，由外围向中心倾倒 10% 的次氯酸消毒剂，约 30 分钟后，清除污染物品，再用次氯酸消毒剂擦拭，并用 75% 酒精喷洒，移动紫外车定点照射 1 小时。
2、其他不明情况污染
1、暂停所有实验操作；
2、清理实验室内所有物品，寻找污染来源；
3、加大实验室的通风；
4、对实验室内所有表面（台面、地面及墙面） 进行消毒；
5、75% 酒精空中喷雾；
6、开启紫外消毒装置，延长紫外照射时间（4 小时以上）；
7、以上措施每日进行，直至污染消除；用新试剂及确认无污染的器材进行原污染项目的试剂空白检测，连续 3 次均阴性后方可进行常规检测。
